Alterações da coloração das hemácias

Coloração normal: o halo central com menor tonalidade deve corresponder há 1/3 da área visualizada no microscópio.

Hipocromia: hemácia que apresenta halo central com menor tonalidade maior que 1/3 da área visualizada no microscópio.

Hiperceomia: hemácia sem halo central com menor tonalidade.

Policromasia: presença de hemácias com tonalidade azul-acinzentada geralmente são células maiores.

Anisocitose

Anisocitose é a variação do tamanho entre as hemácias

Vide a distribuição uniforme das hemácias na figura abaixo

Vide a variação do tamanho das hemácias na figura abaixo

Hemácias

As hemácias são células anucleadas. Apresentam forma circular, com tonalidade central mais clara, pois se apresenta de forma bicôncava.

Tamanho

A melhor maneira para definir o tamanho de uma hemácia é compará-la com um linfócito normal, uma hemácia de tamanho normal apresenta cerce de 2/3 a superfície de um linfócito.

Hemácias de tamanho normal - Normocítica

Hemácias microcítcas

Hemácias Macrocíticas

Como iniciar a análise morfológica

O ideal para análise morfológica, seria antes da avaliação propriamente dita, obter as informações sobre idade, sexo, diagnósticos prévios, medicações em uso e histórico do paciente analisado. Isto facilitará e muito a avaliação morfológica.

Em relação à analise morfológica, avalia-se se o esfregaço apresenta macroscopicamente um forma aceitável

A seguir promove-se a colração da lâmina, com os seguintes corantes: panótipo de Pappenheim, May-Grunwald/ Giemsa, Leishman, entre outros.

Primeira análise no aumento de 100x ou 200x: objetivo avaliar a distribuição das células. Vasculhar o final do esfregaço, para descartar a presença de coágulos, grumos plaquetários, leucocitários entre outros.

Figura acima aumeto de 1000x evidencia-se grumos plaquetários.

A seguir com aumento de 400x análise de forma geral o local, onde as células encontra-se separadas entre si, sem prejudicar a análise morfológica por aglomerados celulares.

Após esta fase com aumento de 1000x com óleo de imersão inicia-se a análise da hemácias, com o obejtivo de analisar variações do tamanho, forma, coloração, fragmentos de hemácias, policromasia, inclusões intracitoplasmáticas.

Figura acima ilustra Anisocitose: variação do tamanho das hemácias.

Figura acima ilustra Poiquilocitose, variação da forma das hemácias

As figuras acima ilustram microcitose (hemácias pequenas) e hipocromia.

Ao término da análise das hemácias, inicia-se a contagem de leucócitos (os livros orientam a análise no aumento de 1000x).

A seguir análise de plaquetas, visando avaliar o tamanho, presença de plaquetas agrupadas, ao redor de leucócitos.

Critérios para análise microscópica

Embora a automação seja um instrumento fundamental, pois contém velocidade de produção, baixo custo,  com excelentes taxas de reprodutibilidade, em certos casos, a análise citomoforlógica é indispensável. É definido pelos próprios fabricantes que os aparelhos contêm limitações e conforme estas limitações apareçam o próprio aparalho imprime um comentário em que sugere-se revisão da análise pela microscopia. Entre estes comentários há dezenas de outros critérios em que se indica revisão. Estes critérios são extremamente diversos de laboratório para laboratório, conforme a demanda e perfil de pacientes analisados.

Abaixo encontra-se o link contendo 41 sugestões para revisão de lâminas, pela International Society for Laboratory Hematology.

http://www.islh.org/2009/index.php?page=consensus_rules

Esfregaço do sangue periférico

Há inúmeros critérios que indicam a análise citomoforfológica das células sanguíneas, estes critérios são variáveis de acordo com as normas dos laboratórios e do perfil de seus pacientes.

O esfregaço, para análise microscópica, é feito com duas lâminas: a lâmina onde será feita a análise e uma lâmina que promoverá a extensão do sangue conforme a figura abaixo.

A: Gota de sangue na extremidade da lâmina, com a lâmina que promoverá o esfregaço, inclina-se a 45 graus, recua-se (B), e promove-se a extensão sem uma parada abrupta (C, D). O esfregaço ideal deve ter bordas laterais livres e um fim em forma de semi-círculo.

O esfregaço geralmente na sua extremidade inicial contém inúmeras células agrupadas em camada e conforme é feita a análise microscópica no sentido do final do esfregaço, as células encontram-se mais "soltas", separadas entre si, melhorando a análise.

A figura acima ilustra que a segunda imagem, no maior aumento, representa o local ideal para a análise citológica, notem que a região do esfregaço é um pouco antes do fim. Percebam também que as hemácias ilustradas encontram-se livres e permitindo avaliar sua forma e distribuição de forma melhor em relação às imagens das extremidades.

Hemograma

Entendo que os principais objetivos do hemograma são: contar células sangüíneas, descrever as alterações da forma, tamanho e distribuição entre elas, reconhecer células anômalas (se presentes), mensurar parâmetros eritrocitários como concentração de hemoglobina, entre outros.

Para realizar um excelente exame, além precisar de treino em relação à morfologia das células sangüíneas, é fundamental compreender suas funções, onde e como são produzidas, o tempo de meia-vida de cada célula, métodos de automação para contagem e diferenciação das células. compreender significados dos parâmetros, interferentes que prejudicam a análise, entre outros.

As funções das células sangüíneas, de forma extremamente simplificada, encontram-se a seguir:

- Hemácias: transporte de oxigênio e gás carbônico

- Leucócitos: imunidade

     * Neutrófilos e Monócitos: imunidade inata (não específica)

     * Linfócitos: imunidade específica

- Plaquetas: participação na hemostasia.

As células sanguíneas são produzidas na medula óssea, através das células tronco hematopoéticas. A Hematopoese, produção das células sangüíneas, inicia-se na fase embrionária e só termina com a morte. Sua principal função é promover a reposição das células sanguíneas de acordo com o tempo de vida de cada célula, como também se adaptar conforme situações de estresse, como: hemorragia, infecções, anemias, etc.

Estima-se que são produzidas ao dia cerca de 50.000.000.000.000 células por dia.

Esta alta produção celular depende de inúmeros fatores, entretanto um dos fatores principais é a presença de células tronco hematopoéticas que têm como função: auto-renovar e se diferenciar em qualquer tipo de célula sangüínea.

Em relação ao tempo de meia vida das células sangüíneas, sabemos que em situações fisiológicas:

- Hemácias: 100 a 120 dias

- Neutrófilos e Monócitos: 6 a 10hs

- Linfócitos: depende, extremamente variável.

- Plaquetas: 7 a 10 dias.

Em relação à contagem automoatizada das células a maioria dos aparelhos apresentam dois principais métodos: impedância elétrica e refração óptica.

Nos dois métodos as células ao serem analisadas encontram-se enfileiradas percorrendo um circuito interno do aparelho em um certo fluxo.

Impedância elétrica: quando a célula passa entre um diferencial de potência elétrica em que há corrente elétrica, gera uma terminada resistência. Através da resistência elétrica os programas dos aparelhos classificam as células conforme tamanho e complexidade, diferenciando as células entre si.

Refração óptica: quando a célula passa no local da análise há interrupção do feixe de luz, promovendo refração óptica e conforme a refração programas especializados conseguem diferenciar pelo tamanho e complexidade as células entre si.

Parâmetros eritrocitários

- Hemoglobina: concentração de hemoglobina

- Hematócrito: proporção de volume de sangue ocupado por hemácias.

- Volume Corpuscular Médio: média do volume de hemácias.

- Hemoglobina Corpuscular Média: concentração de hemoglobina por hemácia.

- Concentração da Hemoglobina Corpuscular Média: relação entre hemoglobina e hematócrito.

- RDW: variação de tamanho e forma das hemácias.

Há ínumeros interferentes que prejudicam a análise de um hemograma. Entre eles encontramos problemas de coleta (dificuldade, formação de coágulos, etc), presença de hemácias aglutinadas, plaquetas agrupadas, leucócitos agrupados, aumento da lipemia, presença de fragmentos celulares entre outros.